ĐỊNH LƯỢNG TRab BẰNG KỸ THUẬT MIỄN DỊCH PHÓNG XẠ

1. NGUYÊN LÝ

RIA-TRAb cho phép định lượng invitro thyrotropin trong huyết thanh hoặc huyết tương người bằng kỹ thuật sandwich 1 bước. Trong quy trình này 1 phức hợp pha rắn kháng thể (KT) kháng TRAb (đơn dòng của chuột), TRAb trong mẫu và KT kháng TRAb được đánh dấu 125I (đơn dòng của chuột) được tạo ra. Kết thúc phản ứng, lượng tracer tự do được loại bỏ bằng gạn hoặc hút và sau đó là rửa.
Lượng tracer được gắn một cách đặc hiệu với ống nghiệm được tráng KT được đo bằng máy đo gamma.

2. CHUẨN BỊ

2.1. Người thực hiện

- Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân
- Kỹ thuật viên Y học hạt nhân
- Cán bộ hóa dược phóng
- Điều dưỡng Y học hạt nhân

2.2. Phương tiện, hóa chất

2.2.1. Phương tiện

- 02 máy đo Gamma Counter đo 125I và xử trí mẫu tự động theo chương trình của hãng.
- 02 máy lắc ngang (200-350 vòng/phút ,thường dùng 300 vòng/phút)
- 02 máy trộn.
- 01 giá cắm bộ micropipet có số hút 100 l, 200 l, 1.000 l và các hộp đựng đầu plastic các loại.
- 01 Giá cắm ống nghiệm .

2.2.2. Hóa chất

RIA kít định lượng TRAb. Thành phần kit gồm:
- KT kháng TRAb của người gắn 125I
- 02 túi x 50 ống nghiệm nhựa tráng KT kháng TRAb của người.
- Các lọ chuẩn TRAb, mỗi lọ 1 ml huyết thanh người có dải nồng độ từ 0 – 50 IU TSH/ml (0-77 pmol/l).
- 01 lọ huyết thanh kiểm tra (CS) TRAb chứa 1 ml huyết thanh người, có nồng độ TRAb cho trước.
- 01 túi plastic.

3. CHỈ ĐỊNH

- Tất cả người bệnh có bệnh liên quan đến tuyến giáp.
- Lồi mắt không rõ nguyên nhân.
- Nhịp tim nhanh không rõ nguyên nhân.
- Cường giao cảm, tay run…

4. CHỐNG CHỈ ĐỊNH

Không có.

5. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

5.1. Lấy bệnh phẩm

Người bệnh cần nhịn ăn sáng,được lấy 1 ml máu tĩnh mạch không chống đông.

5.2. Tiến hành kỹ thuật

- Sau khi lấy mẫu máu, huyết thanh được tách bằng phương pháp thông thường. Tiến hành định lượng ngay hoặc bảo quản đến 24 giờ ở 2-8oC. Thời gian bảo quản lâu hơn nên để ở -20oC, thích hợp hơn là chia đều,tránh làm đông lặp đi lặp lại và tránh làm tan đông. Sau khi làm tan đông, mẫu huyết thanh phải được trộn cẩn thận.
Quy trình định lượng TRAb:
+ Các ống nghiệm được đánh số đầy đủ (chuẩn, huyết thanh kiểm tra, huyết thanh mẫu) như bảng 1.
+ Nhỏ 200 l chuẩn hoặc mẫu bằng pipet vào đáy ống nghiệm. Nên sử dụng đầu pipet mới cho mỗi mẫu.
+ Thêm vào mỗi ống nghiệm 100 l 125I anti TRAb.
+ Các ống nghiệm được lắc trên máy lắc ngang (300 ± 50) vòng/ phút trong 2 giờ ở 18-25oC.
+ Thêm vào mỗi ống nghiệm 1 ml đệm rửa, hỗn hợp được gạn hoặc hút và rửa lại bằng 1 ml đệm rửa.
Các ống nghiệm được đo trong 1 phút bằng đầu đo gamma.

6. NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Số xung/phút của mỗi chuẩn riêng biệt So - S6 được đánh dấu, dựa vào nồng độ hTSH tương ứng trên đồ thị đã được dựng chiếu theo đó. Đường cong chuẩn phù hợp nhất được xây dựng qua các diểm này.
Các giá trị đo được của huyết thanh kiểm tra và mẫu được đánh dấu trên đồ thị và nồng độ TRAb / ml được đọc từ đường cong chuẩn.